乌司他丁对LPS诱导大鼠肾血管球内皮细胞通透性及骨架蛋白的影响
支琳琳1 马晓春1
中国医科大学附属第一医院
目的 研究乌司他丁（UTI）对LPS诱导大鼠肾血管球内皮细胞（RGECs）单层通透性及细胞骨架变化的影响。
方法 体外分离培养大鼠RGECs，鉴定后随机分为5组：C组（正常对照组），L组（LPS 10μg·ml-1孵育6h），U1-3组（分别以UTI 200IU·ml-1、400IU·ml-1、800IU·ml-1作用于LPS 10μg·ml-1前30min，再孵育6h）；采用单层细胞对白蛋白体外通透性实验测定内皮细胞通透性；采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR) 检测血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）mRNA；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测VEGF、VEGFR2蛋白；采用FITC-Phalloidin标记细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）并在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞骨架变化。
结果 与C组相比，L组内皮细胞对白蛋白的通透性明显增加( P < 0. 05)，且RGECs高表达VEGF、VEGFR2mRNA及蛋白( P < 0. 05)；与L组相比，U1-3组内皮细胞通透性和VEGF、VEGFR2mRNA及蛋白的表达显著降低，且呈浓度效应趋势( P < 0. 05)；C组内皮细胞F-actin主要分布于细胞膜侧，形成致密有序的周围束状带；L组外周致密带断裂、甚至消散，F-actin发生解聚；U组F-actin分布较紧密，解聚不明显。
结论 乌司他丁可以降低LPS所致的内皮细胞通透性增加，而这种保护作用可能是通过抑制LPS引起的内皮细胞过分表达VEGF、VEGFR2，并且稳定内皮细胞骨架来实现的。
方法 体外分离培养大鼠RGECs，鉴定后随机分为5组：C组（正常对照组），L组（LPS 10μg·ml-1孵育6h），U1-3组（分别以UTI 200IU·ml-1、400IU·ml-1、800IU·ml-1作用于LPS 10μg·ml-1前30min，再孵育6h）；采用单层细胞对白蛋白体外通透性实验测定内皮细胞通透性；采用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR) 检测血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）mRNA；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测VEGF、VEGFR2蛋白；采用FITC-Phalloidin标记细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）并在激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞骨架变化。
结果 与C组相比，L组内皮细胞对白蛋白的通透性明显增加( P < 0. 05)，且RGECs高表达VEGF、VEGFR2mRNA及蛋白( P < 0. 05)；与L组相比，U1-3组内皮细胞通透性和VEGF、VEGFR2mRNA及蛋白的表达显著降低，且呈浓度效应趋势( P < 0. 05)；C组内皮细胞F-actin主要分布于细胞膜侧，形成致密有序的周围束状带；L组外周致密带断裂、甚至消散，F-actin发生解聚；U组F-actin分布较紧密，解聚不明显。
结论 乌司他丁可以降低LPS所致的内皮细胞通透性增加，而这种保护作用可能是通过抑制LPS引起的内皮细胞过分表达VEGF、VEGFR2，并且稳定内皮细胞骨架来实现的。
