目的 探讨胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）的分离、纯化及原代培养方法，为有关胎儿肺发育及新生儿肺部疾病的研究奠定基础。方法 采用胰酶结合胶原酶的消化方法，分离肺组织细胞成份，然后经差速离心和差速贴壁的方法纯化AECⅡ，进行原代培养；通过台盼蓝染色检测细胞活力，倒置相差显微镜观察细胞生长特点及形态特征，透射电镜鉴定，改良巴氏染色检测细胞纯度以及免疫荧光技术检测表面蛋白C（SPC）的表达。结果 每3～5只胎鼠可获得AECⅡ(36±5)×10⁶，活力(98±2)％。镜下观察原代AECⅡ呈岛状生长，外观呈多边形或立方形。透射电镜可见特征性的板层小体，改良巴氏染色见胞质内有较多颗粒，纯度为(96±3)％，呈现SPC绿色免疫荧光的细胞占96％以上。结论 利用胰酶和胶原酶消化，以及差速离心和差速贴壁的方法可成功分离出高产量、高纯度的胎鼠AECⅡ，能满足体外进一步实验的需要。