高葡萄糖对衰老蛋白p66Shc表达及磷酸化的影响
聂静1 孙林2 刘伏友2 黎祖荣1 王懿春1
1. 湖南省肿瘤医院重症医学科, 2. 中南大学湘雅二医院肾内科
目的 观察高浓度葡萄糖环境下人近端肾小管上皮细胞HK-2中衰老蛋白p66Shc的表达和磷酸化即对线粒体ROS产生的影响，探讨糖尿病肾病的发病机制。
方法 常规培养正常人近端肾小管上皮细胞（HK-2），将不同浓度D-葡萄糖或30mM D-葡萄糖在不同时间点(0h-48h)作用于体外培养的HK-2细胞，采用Realtime-PCR检测p66Shc mRNA的表达变化，Westem blot检测p66Shc及磷酸化p66Shc蛋白的表达，激光共聚焦检测MitoSox（线粒体ROS标记物）的表达。
结果 HK-2细胞表达p66Shc，随着D-葡萄糖浓度的增加和作用时间的延长， p66Shc mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势，磷酸化p66Shc蛋白的表达及线粒体ROS亦呈浓度及时间依赖性上升。
结论 首次证明HK-2表达p66Shc，高葡萄糖能明显促进HK-2细胞中p66Shc表达及磷酸化，这可能是糖尿病肾病线粒体ROS过度产生的重要机制之一。
方法 常规培养正常人近端肾小管上皮细胞（HK-2），将不同浓度D-葡萄糖或30mM D-葡萄糖在不同时间点(0h-48h)作用于体外培养的HK-2细胞，采用Realtime-PCR检测p66Shc mRNA的表达变化，Westem blot检测p66Shc及磷酸化p66Shc蛋白的表达，激光共聚焦检测MitoSox（线粒体ROS标记物）的表达。
结果 HK-2细胞表达p66Shc，随着D-葡萄糖浓度的增加和作用时间的延长， p66Shc mRNA和蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势，磷酸化p66Shc蛋白的表达及线粒体ROS亦呈浓度及时间依赖性上升。
结论 首次证明HK-2表达p66Shc，高葡萄糖能明显促进HK-2细胞中p66Shc表达及磷酸化，这可能是糖尿病肾病线粒体ROS过度产生的重要机制之一。
