血红素加氧酶-1对ALI大鼠AEC-Ⅱ细胞凋亡及Bcl-2、p53的影响
陈淼1 吴艳1 王洪敏3 吴双2 王宇辉1 刘海霞1
1. 遵义医学院附属医院ICU, 2. 河北联合大学附属医院内分泌肾内科, 3. 山东省微山县人民医院麻醉科
目的 探讨血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）对过氧化氢（hygrogen peroxide，H2O2）所致大鼠急性肺损伤(acute lung injury，ALI)肺泡Ⅱ型上皮细胞（alveolar epithelial type Ⅱ cell，AEC-Ⅱ）细胞凋亡以及对凋亡蛋白Bcl-2、p53表达的影响。
方法 健康雄性SD大鼠20只，均予腹腔麻醉并取肺，分离纯化AEC-Ⅱ以1×106个/ml接种于培养板，原代培养24 h，将AEC-Ⅱ细胞随机分为四组：正常组，H2O2组，HO-1组，HO-1抑制组（锌原卟啉Ⅸ）。采用H2O2（0.5 mmol/L）刺激AEC-Ⅱ，复制活性氧（Reactive oxygen species，ROS）攻击损伤AEC-Ⅱ细胞的体内情况，建立ALI细胞模型；用HO-1（0.2 μmol/L）或锌原卟啉Ⅸ（10 μmol/L）于同时间处理2.5 h。按照Annexin V- FITC （Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit）细胞凋亡检测试剂盒操作，流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用Western blot法观察凋亡蛋白Bcl-2、p53的表达。
结果 流式细胞仪检测：（同时间点）与正常组比较，H2O2组细胞凋亡率增加（P＜0.05），且随H2O2作用时间的延长细胞凋亡率增加；与H2O2组比较，HO-1组AEC-Ⅱ细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）；与HO-1组比较，HO-1抑制组细胞凋亡率增加（P＜0.05）。Western blot法：与正常组比较，HO-1组Bcl-2蛋白的表达明显增强、p53蛋白的表达减弱，差异有统计学意义（P＜0.05）；与HO-1组比较，H2O2组、HO-1抑制组Bcl-2蛋白的表达减弱而p53蛋白的表达明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论 HO-1对H2O2所致大鼠ALI过程中AEC-Ⅱ损伤具有保护作用，其保护作用机制与增加Bcl-2表达、抑制p53表达有关。
方法 健康雄性SD大鼠20只，均予腹腔麻醉并取肺，分离纯化AEC-Ⅱ以1×106个/ml接种于培养板，原代培养24 h，将AEC-Ⅱ细胞随机分为四组：正常组，H2O2组，HO-1组，HO-1抑制组（锌原卟啉Ⅸ）。采用H2O2（0.5 mmol/L）刺激AEC-Ⅱ，复制活性氧（Reactive oxygen species，ROS）攻击损伤AEC-Ⅱ细胞的体内情况，建立ALI细胞模型；用HO-1（0.2 μmol/L）或锌原卟啉Ⅸ（10 μmol/L）于同时间处理2.5 h。按照Annexin V- FITC （Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit）细胞凋亡检测试剂盒操作，流式细胞仪检测细胞凋亡率。应用Western blot法观察凋亡蛋白Bcl-2、p53的表达。
结果 流式细胞仪检测：（同时间点）与正常组比较，H2O2组细胞凋亡率增加（P＜0.05），且随H2O2作用时间的延长细胞凋亡率增加；与H2O2组比较，HO-1组AEC-Ⅱ细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）；与HO-1组比较，HO-1抑制组细胞凋亡率增加（P＜0.05）。Western blot法：与正常组比较，HO-1组Bcl-2蛋白的表达明显增强、p53蛋白的表达减弱，差异有统计学意义（P＜0.05）；与HO-1组比较，H2O2组、HO-1抑制组Bcl-2蛋白的表达减弱而p53蛋白的表达明显增强，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论 HO-1对H2O2所致大鼠ALI过程中AEC-Ⅱ损伤具有保护作用，其保护作用机制与增加Bcl-2表达、抑制p53表达有关。
