依达拉奉及异丙酚联合预处理、后处理对乳鼠离体脑皮质细胞缺血再灌注损伤保护作用的研究
付江泉1 王迪芬1 姚娜1 宋曦1
贵阳医学院附属医院重症医学科
目的 1、探讨依达拉奉及异丙酚两种药物联合预处理、后处理对乳鼠离体脑皮质细胞脑缺血再灌注损伤保护作用及可能机制；2、比较预处理、后处理不同时间窗脑保护效应。
方法 1、取出生24小时以内新生SD乳鼠脑皮质细胞，体外原代培养至第六天，随机分为5组，9个亚组：A组（正常对照组）；B组（联合药物24小时对照组）；C组（药物损伤组）；D组（预处理组）包括：D1组、D2组、D 3三个亚组。E组(后处理组) 包括：E1组、E2组、E3组三个亚组。2、药物预处理 ：脑皮质细胞体外培养至第七天，D组中各亚组提前24小时、2小时、即刻分别用3mg/L异丙酚及100umol/L依达拉奉两种药物培养基联合预处理原代培养的神经细胞。3、药物后处理 ：E组培养至第7天予200μmol／L谷氨酸损伤30分钟，E1、E2、E3组予两种药物处理30分钟、2h、12h，其后三组均换用正常培养基继续培养24小时后观察指标。4、实验各组均完成以下各项指标观察：HE染色后观察神经细胞形态变化；通过MTT、LDH、ATP观察神经细胞成活率和细胞损伤情况；通过SOD、MDA观察神经细胞抗氧化和氧化水平；流式细胞仪检测神经细胞凋亡；通过透射电镜观察超微结构变化。
结果 一、预处理组：与药物损伤组相比较，各联合预处理组MTT、SOD、ATP值升高，以24小时联合预处理组值最高；与药物损伤组相比较，各联合预处理组MDA、LDH、神经细胞凋亡率值有明显下降且以24小时联合预处理组P值最低。在电镜及光镜下细胞形态观察见药物联合预处理各组细胞形态受损较损伤组均有不同程度减轻二、后处理组：联合后处理30分钟组、神经细胞存活率高于损伤组和其他后处理组，LDH漏出率、MDA含量和细胞凋亡率较损伤组和其他后处理组低，SOD活力、ATP酶活力较损伤组和其他后处理组高，与损伤组比较P<0.05；后处理2h组和后处理12h组数值与损伤组相比较P>0.05。在电镜及光镜下细胞形态观察见药物联合后处理各组细胞形态受损较损伤组均有不同程度减轻。三、24小时联合预处理组与30分钟组联合后处理组各项指标比较没有统计学意义。
结论 两种药物联合预处理、后处理对乳鼠脑皮质细胞脑缺血再灌注损伤均有不同程度的保护作用。其中24小时联合预处理组与30分钟组联合后处理组保护作用最佳。二者比较无统计学意义。
