穿心莲内酯（AP）对人脐静脉内皮细胞表达趋化因子及CD40-CD40L的影响
刘环芹1 杨鹏1 李树生1
华中科技大学同济医学院附属同济医院
目的 观察不同浓度的穿心莲内酯(andrographolide)对经氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达趋化因子MCP-1、MIP-1α及表面抗原CD40-CD40L的影响，探讨穿心莲内酯抗动脉粥样硬化的作用机制。
方法 于同济医院产科手术室在无菌条件下取健康新生儿脐带，采用胰酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞。采用形态学及免疫荧光Ⅷ因子相关抗原鉴定内皮细胞。将第3代细胞以1×106 /ml的浓度接入6孔板于5%CO2、37℃培养箱中培养，待细胞贴满培养板底部后行24小时无血清同步培养，然后将细胞分成6组：1、空白对照组 ：加入2ml M199培养24小时；2、ox-LDL组：M199＋0.2mg ox-LDL 培养24小时；3、ox-LDL＋AP(25mg/L)组 ；4、ox-LDL＋AP(50mg/L)组；5、ox-LDL＋AP(100mg/L)组；6、ox-LDL＋AP(200mg/L)组；ox-LDL终浓度为0.1mg/ml。3-6组先加入喜炎平注射液培养2小时后，再加入ox-LDL培养22小时。取培养上清液用于间接酶联免疫实验（ELISA）检测MCP-1、MIP-1α蛋白表达；细胞用于提取总的RNA及免疫荧光实验；应用定量RT-PCR检测MCP-1、MIP-1αmRNA的表达；采用间接免疫荧光法检测各组细胞表面CD40/CD40L的表达。
结果 与对照组相比，ox-LDL组MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.01)，CD40-CD40L荧光亮度明显增强；与ox-LDL组相比，低剂量穿心莲内酯组（25mg/L、50mg/L组）MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达无明显变化（P>0.05)，CD40-CD40L荧光亮度无明显改变；而中高剂量穿心莲内酯组（100mg/L 、200mg/L 组）MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.01),CD40-CD40L荧光强度明显减弱，并且200mg/L 组低于100mg/L 组（P<0.01)。
结论 中等以上浓度的穿心莲内酯具有抑制内皮细胞表达MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达的作用，其作用机制可能是通过抑制CD40-CD40L信号系统完成的。
方法 于同济医院产科手术室在无菌条件下取健康新生儿脐带，采用胰酶消化法原代培养人脐静脉内皮细胞。采用形态学及免疫荧光Ⅷ因子相关抗原鉴定内皮细胞。将第3代细胞以1×106 /ml的浓度接入6孔板于5%CO2、37℃培养箱中培养，待细胞贴满培养板底部后行24小时无血清同步培养，然后将细胞分成6组：1、空白对照组 ：加入2ml M199培养24小时；2、ox-LDL组：M199＋0.2mg ox-LDL 培养24小时；3、ox-LDL＋AP(25mg/L)组 ；4、ox-LDL＋AP(50mg/L)组；5、ox-LDL＋AP(100mg/L)组；6、ox-LDL＋AP(200mg/L)组；ox-LDL终浓度为0.1mg/ml。3-6组先加入喜炎平注射液培养2小时后，再加入ox-LDL培养22小时。取培养上清液用于间接酶联免疫实验（ELISA）检测MCP-1、MIP-1α蛋白表达；细胞用于提取总的RNA及免疫荧光实验；应用定量RT-PCR检测MCP-1、MIP-1αmRNA的表达；采用间接免疫荧光法检测各组细胞表面CD40/CD40L的表达。
结果 与对照组相比，ox-LDL组MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达明显升高（P<0.01)，CD40-CD40L荧光亮度明显增强；与ox-LDL组相比，低剂量穿心莲内酯组（25mg/L、50mg/L组）MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达无明显变化（P>0.05)，CD40-CD40L荧光亮度无明显改变；而中高剂量穿心莲内酯组（100mg/L 、200mg/L 组）MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.01),CD40-CD40L荧光强度明显减弱，并且200mg/L 组低于100mg/L 组（P<0.01)。
结论 中等以上浓度的穿心莲内酯具有抑制内皮细胞表达MCP-1、MIP-1α蛋白及mRNA表达的作用，其作用机制可能是通过抑制CD40-CD40L信号系统完成的。
