多重荧光定量PCR法鉴定侵袭性曲霉菌的研究
邱桂霞1 毛璞1 黎毅敏1
广州呼吸疾病研究所
目的 建立一种快速、灵敏、特异的鉴定烟曲霉菌,黄曲霉菌,土曲霉菌,黑曲霉菌的多重荧光定量PCR方法。
方法 以rDNA及转录间隔区Ⅱ（internally transcribed spacers Ⅱ，ITSⅡ）为靶目标，设计并合成分别针对烟曲霉菌,黄曲霉菌,土曲霉菌,黑曲霉菌的种特异探针和真菌通用引物，建立多重荧光定量PCR反应体系，建立定量标准曲线, 评价其敏感度,特异性,及重复性.并用该方法初步对呼吸道相关标本进行检测,评价其对临床标本检测的敏感性及特异性.
结果 本研究建立的针对烟曲霉菌菌、黄曲霉菌、土曲霉菌和黑曲霉菌的多重荧光定量PCR法，只与上述的四种曲霉DNA发生特异反应,其对四种曲霉的最低检测浓度为1×102孢子/mL；对高，中，低浓不同浓度的DNA模板连续5次进行荧光定量PCR反应，批内及批间重复性试验均符合要求,具有较好的重复性及稳定性.检测来自28例临床高度怀疑侵袭性曲霉菌感染患者及健康体检者50例的痰标本，显示荧光定量PCR的灵敏度和特异性分别为82.1%（23/28）和94%（47/50）。
结论 多重荧光定量PCR法鉴定烟曲霉菌菌、黄曲霉菌、土曲霉菌和黑曲霉菌，特异度强，敏感度高，重复性好，且快速、简便，该方法将有助于曲霉感染的早期诊断和针对性治疗。
方法 以rDNA及转录间隔区Ⅱ（internally transcribed spacers Ⅱ，ITSⅡ）为靶目标，设计并合成分别针对烟曲霉菌,黄曲霉菌,土曲霉菌,黑曲霉菌的种特异探针和真菌通用引物，建立多重荧光定量PCR反应体系，建立定量标准曲线, 评价其敏感度,特异性,及重复性.并用该方法初步对呼吸道相关标本进行检测,评价其对临床标本检测的敏感性及特异性.
结果 本研究建立的针对烟曲霉菌菌、黄曲霉菌、土曲霉菌和黑曲霉菌的多重荧光定量PCR法，只与上述的四种曲霉DNA发生特异反应,其对四种曲霉的最低检测浓度为1×102孢子/mL；对高，中，低浓不同浓度的DNA模板连续5次进行荧光定量PCR反应，批内及批间重复性试验均符合要求,具有较好的重复性及稳定性.检测来自28例临床高度怀疑侵袭性曲霉菌感染患者及健康体检者50例的痰标本，显示荧光定量PCR的灵敏度和特异性分别为82.1%（23/28）和94%（47/50）。
结论 多重荧光定量PCR法鉴定烟曲霉菌菌、黄曲霉菌、土曲霉菌和黑曲霉菌，特异度强，敏感度高，重复性好，且快速、简便，该方法将有助于曲霉感染的早期诊断和针对性治疗。
