Toll样受体4小干扰RNA对腹腔感染脓毒症急性肾损伤小鼠的保护作用

刘丽霞¹ 李勇² 胡振杰¹ 苏洁¹ 霍焱¹ 谭碧波²
1. 河北医科大学第四医院ICU, 2. 河北医科大学第四医院外3科

目的 观察小干扰RNA（small interfering RNA, SiRNA）沉默小鼠Toll样受体（toll like receptor, TLR）4对腹腔多菌感染脓毒症急性肾损伤（acute kidney injury, AKI）小鼠肾损伤的影响。
方法 预先构建的2条针对TLR4的SiRNA表达载体体外转染小鼠巨噬细胞RAW264.7，应用实时荧光定量聚合酶链反应（realtime PCR）、Western blot方法检测RAW264.7 TLR4 mRNA和蛋白表达，选择沉默效率高的一条用作体内试验。将125只C57BL/6小鼠随机分成5组（n=25）：假手术组、模型组（盲肠结扎穿孔术组，即CLP组）、SiRNA空白对照组（S-B组，在CLP术前24h给予Mirus转染试剂1.5ml）、SiRNA空质粒对照组（S-N组，在CLP术前24h给予Mirus转染试剂1.5ml+SiRNA空质粒50ug）、TLR4 SiRNA干预组（S-T4组，在CLP术前24h给予Mirus转染试剂1.5ml+ TLR4 SiRNA质粒50ug）。各组均于术后6h、12h、24h检测血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）浓度，流式细胞仪检测肾组织细胞凋亡率，realtime PCR、免疫组化法检测肾组织TLR4 mRNA、蛋白表达（术后24h），观察小鼠肾组织病理学。每组余10只观察4天和7天的存活率。
结果 sham组比较，CLP术后血BUN、Cr浓度及肾组织细胞凋亡率显著性增加（P＜0.05），TLR4 mRNA和蛋白表达显著性增加（P＜0.05），在肾小管上皮细胞和肾小球细胞胞质TLR4表达增加，肾病理损伤加重，存活率显著性降低（P＜0.05）；与CLP组比较，S-B组、S-N组上述各项指标均无显著性差异（P＞0.05）；与CLP组比较，S-T4组肾组织TLR4 mRNA和蛋白表达显著性降低（P＜0.05），TLR4在肾小管上皮细胞、肾小球细胞表达少见，肾组织细胞凋亡率显著性降低（P＜0.05），肾病理损伤减轻，血BUN、Cr浓度显著性降低（P＜0.05），肾功能改善，存活率显著性增加（P＜0.05）。
结论 LR4可能在腹腔多菌感染脓毒症AKI发病机制中起着关键作用，TLR4 SiRNA沉默TLR4表达在防治腹腔多菌感染脓毒症AKI方面有一定价值。