余志辉，黄红川，毛璞，刘冬冬，莫红缨，何为群，刘晓青，黎毅敏

脓毒症(sepsis)是指微生物入侵机体感染后所致的全身炎症反应综合征，可发展为严重脓毒症(severe sepsis)、脓毒性休克(septic shock)甚至多器官功能障碍综合征(MODS)。髓系细胞触发受体-1(Triggering Receptor Expressed on Myeloid Cells , TREM-1 )为免疫球蛋白超家族成员，主要表达于中性粒细胞和单核细胞表面，TREM-1与配体结合激活TREM-1/DAP12信号通路，增强炎症因子释放、炎症细胞浸润，在脓毒症发生发展中有重要作用。目前TREM-1的天然配体尚未明确。在脓毒症患者送检标本中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌为常见病原菌；而热失活金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌孵育处理单核细胞、中性粒细胞后TREM-1表达明显上调，提示TREM-1配体可能存在这两种病原菌上。

目的 本研究通过金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌及其各种成分对人单核细胞、中性粒细胞处理后TREM-1 mRNA表达水平影响,了解各处理方法对TREM-1信号通路影响及其配体可能定位以寻找TREM-1配体。

方法 密度梯度离心法分离人外周血单核细胞和中性粒细胞进行原代培养。培养金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌菌株；高渗透压诱导培养细胞壁缺陷的金黄色葡萄球菌L型和铜绿假单胞菌L型。分别加入金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌L型及铜绿假单胞菌L型于中性粒细胞悬液、单核细胞悬液，置37℃，5%CO₂条件培养24h。玻璃珠破碎法破碎菌体，超声提取获得金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌细胞壁，分别加入上述细菌细胞壁于原代培养的中性粒细胞悬液、单核细胞悬液，置37℃，5%CO₂条件培养24h。十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法提取细胞壁多糖，氯仿-甲醇法提取脂类，硫酸铵盐析法提取细胞壁蛋白，分别加入上述细菌细胞壁组分于原代培养的中性粒细胞悬液、单核细胞悬液，置37℃，5%CO₂条件培养24h。取孵育后各组单核、中性粒细胞提取mRNA，逆转录为cDNA并以GAPDH为内参基因，荧光定量PCR检测TREM-1 mRNA表达水平。

结果 金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的标准菌株、细胞壁和细胞壁糖类成分均可使单核细胞和中性粒细胞TREM-1 mRNA表达水平明显升高。其中金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌细胞壁多糖处理细胞后可分别使单核细胞TREM-1表达水平上调到空白对照组的5.15±0.56倍，7.22±0.73倍，中性粒细胞上调3.86±0.20倍，4.03±0.15倍（P<0.05）。

结论  人TREM-1配体可能位于病原菌的细胞壁上，如金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌的细胞壁，其成分可能为细胞壁的多糖分子。

【关键词】脓毒症；髓系细胞触发受体-1；配体；多糖