MK-801在不同宫内缺氧所致胎鼠肺发育受阻中的作用
周小程1,2 吕梅1,3 罗自强4 伍赶球5 黄河1 岳少杰1
1. 湘雅医院新生儿科, 2. 湖南省妇幼保健院, 3. 厦门市妇幼保健院林巧稚妇儿医院新生儿科, 4. 中南大学湘雅医学院生理学系, 5. 中南大学湘雅医学院组胚教研室
目的 通过建立宫内缺氧模型,观察宫内缺氧对胎鼠发育(重点胎肺发育)的影响。检测空气对照组及缺氧组(缺氧2天、6天和10天组) NMDA受体在胎肺组织表达情况,并观察NMDA受体拮抗剂(MK-801)对胎鼠发育(重点胎肺发育)的作用。
方法 1.动物模型的制备及实验分组 通过降低母鼠吸入氧浓度至10.5±1.0% ,每天持续缺氧8小时，建立宫内缺氧的模型。实验分组为:空气对照组，空气2天+MK-801、6天+MK-801和10天+MK-801组，缺氧2天、6天和10天组，缺氧2天+MK-801、6天+MK-801和10天+MK-801组。于孕21天剖宫后对胎鼠进行相关检查。 2.胎肺组织NMDARmRNA表达 空气对照组及各缺氧对照组部分肺组织进行RNA的提取,进行NMDA1及2A、B、C、D受体mRNA的Real Time-PCR测定(由上海闪晶公司完成)。 3.一般情况相关检查 记录胎鼠体重、胎鼠个数、存活率、胎心(右心室/左心室+室间隔即RV/LV+S)等。 4.胎盘组织病理学检查 留取空气对照组及各缺氧对照组胎盘连同脐带及血管两例(选择标准:各组胎鼠重量最大和最小者的胎盘连同脐带),进行病理学相关检查。 5.肺组织相关检查 称量所有胎鼠的肺湿重,取部分胎肺左叶作HE染色、辐射状肺泡计数(RAC)、肺小动脉外径、管壁厚度 、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)、血管总面积、管壁面积、管壁面积/总面积(WA%)检测。 6.统计学分析 (one-way ANOVA)及SNK-q检验。p<0.05认为有统计学意义。试验数据以均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析对
结果 1.胎肺组织NMDAR表达 空气对照组，胎鼠肺组织以NMDAR2D表达为主；宫内缺氧下，胎鼠肺组织各NMDAR表达均增高,于缺氧6天表达最高（p＜0.01），其中NMDAR2D表达最显著；缺氧10天,各NMDAR在胎肺组织的表达与空气对照组无差异。 2. 胎鼠存活率 随着缺氧时间的延长动物的存活率降低（p< 0.01）。加入MK-801,明显地提高各缺氧组胎鼠存活率(p<0.01)。 3. 胎鼠情况 各缺氧组胎鼠体重明显低于空气对照组（p<0.01）,随着缺氧天数增加而进一步降低。加入MK-801,减轻了缺氧所致胎鼠体重下降;而各空气+MK-801组与空气对照组比较, 胎鼠体重要轻于后者(p<0.01)。各缺氧组胎鼠右心室/左心室+室间隔(RV/LV+S)均明显高于空气对照组（p<0.01）,不随缺氧天数增加而进一步增加。加入MK-801,减轻了缺氧所致RV/LV+S下降;而各空气+MK-801组与空气对照组比较, RV/LV+S要大于后者(p<0.01)。 4.胎盘组织HE染色 空气对照组胎盘绒毛结构正常,各缺氧组与对照组无差异,脐动脉大小在各缺氧组与对照组间无差异。 5.胎肺情况 宫内缺氧2天,胎肺重量即明显降低（p<0.01），随宫内缺氧天数的增加进一步降低。加入MK-801,减轻了缺氧所致胎肺重量下降。各空气+MK-801组与空气对照组比较, 胎肺重量要轻于后者(p<0.01)。而肺重/体重的比值在缺氧2天组明显降低（p<0.01），随宫内缺氧天数增加有增加。 6.胎肺组织HE染色 空气对照组肺泡结构规则,排列有序,肺泡间隔分布均匀,肺泡腔未见明显渗出。随着缺氧天数增加,肺泡结构不规则,排列紊乱, 肺泡间隔分布不均匀,肺泡腔见明显渗出。各缺氧＋MK-801组较缺氧组肺泡数量增加,肺泡结构规则,排列有序,肺泡腔红细胞渗出减少。各空气＋MK-801组较空气组肺泡数量减少,肺泡结构不规则,排列紊乱,肺泡间隔无明显变化,可见肺泡腔明显红细胞渗出。空气对照组肺小动脉管壁较薄、管腔较大,缺氧10天组肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄（p<0.01）。缺氧+MK-801组与缺氧对照组比, 肺小动脉改变不明显 , 空气+MK-801组与空气对照组比, 肺小动脉改变不明显。 7.辐射状肺泡计数(RAC) 缺氧2天RAC值即明显降低，随着缺氧时间的延长进一步降低（p< 0.01）。加入MK-801,减轻了缺氧所致RAC下降;而各空气+MK-801组与空气对照组比较, RAC值小于后者（p<0.01）。 8.肺血管形态测定 随着宫内缺氧时间的延长肺血管形态发生变化。 缺氧10天组,其管壁面积/总面积(WA%)、管壁厚度(um) 、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)的p<0.01。加入MK-801,缺氧组肺血管形态有改善。缺氧10天+MK-801组与缺氧10天组比,管壁面积/血管总面积(WA%)、管壁厚度(um)、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)的p< 0.05。空气+MK-801组相对于空气对照组,肺血管形态无差异。
结论： 1. 宫内缺氧导致胎鼠发育受限、胎肺发育不良;随着宫内缺氧时间的延长，胎鼠发育受限进一步加重。2. 首次观察NMDAR在正常及缺氧胎鼠肺发育中的表达情况。 3. 首次发现MK-801对宫内缺氧下胎鼠发育有保护作用, 重点观察到MK-801对宫内缺氧下胎鼠肺组织发育的保护作用。4. 单独使用MK-801对胎鼠发育有一定的毒副作用。
