大鼠铜绿假单胞菌肺炎模型的建立

刘冬冬¹ 余志辉¹ 毛璞¹ 黄红川¹ 刘晓青¹ 何为群¹ 莫红缨¹ 黎毅敏¹
广州医学院第一附属医院

                                                           大鼠铜绿假单胞菌肺炎模型的建立

 

刘冬冬 余志辉 毛璞 黄红川 刘晓青 何为群 莫红缨 黎毅敏（通讯作者）    广州医学院第一附属医院 510120

 

摘要： 目的 探讨铜绿假单胞菌导致大鼠肺部炎症模型的稳定建立。方法 将健康雄性SPF级Sprague Dawley大鼠30只随机分为2组：铜绿假单胞菌肺炎模型组与对照组，每组15只。将铜绿假单胞菌（ATCC 27853）接种至LB培养液复苏、增菌，并置于37°C孵箱孵育16h后，比浊法PBS调整菌液浓度为8×10⁸/ml，模型组大鼠通过直视下气管直接注射法接种稀释菌液0.3ml，对照组同样方法接种与模型组相同剂量的PBS溶液。观察接种后24h大鼠的临床表现，对其支气管肺泡灌洗液（BALF）、肺组织进行细菌学、细胞学、病理学研究，并测定肺组织湿/干比(W/D)。结果 （1）临床表现 对照组大鼠精神状态良好，呼吸平顺，进食正常；模型组大鼠出现蜷缩竖毛、精神萎靡、点头呼吸、进食减少。（2）肺组织石蜡切片HE染色显示，对照组肺组织结构完整，肺泡腔无出血及炎症细胞渗出，肺泡间隔无水肿；模型组出现肺组织广泛出血、大量白细胞尤其中性粒细胞浸润、肺泡间隔增厚。（3）肺组织匀浆菌落计数是通过将已称重为0.1g的肺组织于4℃冰浴下用1ml PBS研磨成肺组织匀浆，并将匀浆倍比稀释至10^-5 ，分别取各浓度的匀浆0.1ml均匀涂布于血平板上，置于37℃孵箱孵育48h，选取菌落在30-300个之间的平板进行菌落计数，计数结果为＞6×10⁷ CFU/g。(4) 细胞因子检测，支气管肺泡灌洗液离心后取上清通过酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测炎症因子TNF-a及IL-1b的水平（见表1）。（5）支气管肺泡灌洗液白细胞计数，灌洗液离心后弃上清再用1ml PBS混匀滴于计数板计数(见表2)。（6）肺湿/干比是通过取大鼠的左肺称其湿重后，放置于烘箱72h至恒重，称干重，得湿/干重比，结果为对照组4.43±0.11，模型组6.02±0.29 模型组比值高于对照组，P＜0.01，差异有统计学意义。结论 通过直视下气管直接注射法将铜绿假单胞菌接种至大鼠肺部成功建立大鼠肺炎模型，为进一步开展肺炎大鼠的蛋白组学研究奠定了基础。

 

表1：酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定两组支气管肺泡灌洗液细胞因子水平(pg/ml)

组别	TNF-α	IL-1β
对照组 感染组	19.17±0.33 67.50±0.19*	17.27±0.28 58.63±0.23*

TNF-a的表达量模型组明显高于对照组，*P＜0.01（差异有统计学意义）；IL-1b的表达量模型组明显高于对照组，*P＜0.01（差异有统计学意义）

 

表2：两组支气管肺泡灌洗液白细胞计数的变化（×10⁹/L）

组别	白细胞计数
对照组 感染组	0.26±0.13 1.91±0.29*

 

 

 

 

模型组白细胞数明显高于对照组，*P＜0.01(差异有统计学意义)