目的 核因子κB (nuclear factor-kappa B，NF-κB)是多种信号转导通路的汇聚点，可能在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征、肺纤维化、支气管哮喘等急慢性肺部炎性疾病的发病过程中起重要作用。针对NF-κB的异源二聚体P50/P65研究上述疾病发病机制和治疗策略是目前的热点之一。本研究旨在构建针对人核因子（N F）-κB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA（shRNA）逆转录病毒表达载体，并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-κB P65及相关基因表达的作用。方法 根据shRNA设计原则，在人NF-κB P65全长序列中选取含19个核苷酸靶序列，设计形siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中，构建针对NF-κB P65基因的shRNA表达载体。经293A细胞包装，并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后，感染THP-1细胞。分别采用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平检测其对NF-κB P65的干扰效果以及对肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响。结果 限制性酶切和基因测序证实成功构建针对人NF-κB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体；其感染THP-1细胞后，NF-κB P65 的mRNA和蛋白表达明显抑制，同时TNF-α和IL-1β的表达也明显下调。结论 成功地构建了NF-κB P65 shRNA逆转录病毒表达载体，该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-κB P65的表达，下调促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的表达，为通过RNA干扰技术进行NF-κB P65相关炎性疾病发生机制和治疗研究奠定了基础。